Продукты пищевые. Метод определения Bacillus cereus

ГОСТ 10444.8-88

Группа Н09

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Метод определения
Bacillus cereus

Food products. Method for determination of Bacillus cereus

ОКСТУ 9109

Дата введения 1990-01-01

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Государственным агропромышленным комитетом СССР
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 25 августа 88* N 3021
________________
* Соответствует оригиналу.
3. В стандарт введен международный стандарт ИСО 7932 (1987)

4. ВЗАМЕН ГОСТ 10444.10-75

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД,
на который дана ссылка
Номер пункта

ГОСТ 3640-94

2.1

ГОСТ 6672-75

2.1

ГОСТ 8756.18-70

1.2

ГОСТ 9284-75

2.1

ГОСТ 10444.1-84

1.2; 2.1; 3.2.3; 3.2.4; 3.2.5; 3.2.8; 3.2.9; 4.2.4; 4.2.5

ГОСТ 10444.7-86

3.1.10

ГОСТ 24104-88

2.1

ГОСТ 24363-80

2.1

ГОСТ 26668-85

1.1

ГОСТ 26669-85

1.2

ГОСТ 26670-91

4.1.2; 5.4

ГОСТ 26809-86

1.1

ГОСТ 30425-97

4.2.1

6. Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)

7. ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод определения Bacillus cereus, в том числе близких к нему видов В. anthracis, В. thuringiensis, В. cereus var. mycoides.
Метод основан на выделении В. cereus из колоний, полученных при поверхностном посеве продукта, его разведения или культуральной жидкости на селективные среды. Принадлежность выделенных колоний к В. cereus определяют по морфологическим и биохимическим свойствам. В зависимости от требований нормативного документа подсчитывают количество или учитывают присутствие (отсутствие) В. cereus в исследуемом продукте.
Метод предназначен для:
установления соответствия микробиологических показателей качества пищевого продукта требованиям нормативного документа;
исследования продукта по санитарно-эпидемиологическим показаниям;
анализа микрофлоры посевов (культуральной жидкости), в которых обнаружены мезофильные факультативно-анаэробные микроорганизмы, при необходимости подтверждения присутствия в посевах В. cereus.

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

1.1. Отбор проб пищевых продуктов по ГОСТ 26668, ГОСТ 26809.
1.2. Подготовка проб пищевых продуктов к анализу - по ГОСТ 26669.
Консервы проверяют на герметичность по ГОСТ 8756.18.
- не менее 7 сут.
Пищевые продукты, в которых нормируется допустимое количество В. cereus, термостатированию не подлежат.
).
Исходные разведения продуктов, с массовой долей NaCl более 5%, готовят с использованием пептонной воды; исходные разведения мясных, молочных продуктов и молока готовят с использованием физиологического раствора. Для приготовления последующих десятикратных разведений используют пептонно-солевой раствор. Пептонную воду и пептонно-солевой раствор готовят по ГОСТ 26669, физиологический раствор - по ГОСТ 10444.1.
Из пробы пищевого продукта, в котором нормируется количество В. cereus, или его исходного разведения готовят ряд разведений в соответствии с допустимым количеством В. cereus, указанном в нормативно-технической документации на конкретный вид пищевого продукта. Культуральную жидкость разводят так, чтобы получить при высеве раздельные колонии.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

2.1. Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1, а также аппаратуру, материалы и реактивы, указанные ниже:
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104*, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 2 мг (для взвешивания реактивов);
_________________
* С 01.07.2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104*, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 20 мг (для взвешивания продукта);
_________________
* С 01.07.2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.
микроскоп световой биологический с приспособлением для фазовоконтрастного микроскопирования;
стекла предметные по ГОСТ 9284;
стекла покровные по ГОСТ 6672;
петлю бактериологическую;
термостат с диапазоном рабочих температур от 28 до 55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С;
шпатели стеклянные;
калия гидроокись по ГОСТ 24363;
креатин;
полимиксин В сульфат во флаконах по 25 мг (250000 ЕД) и по 50 мг (500000 ЕД);
полимиксин М сульфат во флаконах по 500000 ЕД;
кислоту 5-амино-2-нафтален сульфоновую;
кислоту сульфаниловую;
феноловый красный, индикатор;
цинк - порошок по ГОСТ 3640.

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Приготовление растворов
, доводят объем дистиллированной водой до метки.
Применяют для постановки реакции на образование ацетилметилкарбинола.
, доводят объем дистиллированной водой до метки.
Применяют для приготовления раствора индикатора фенолового красного.
воды).
Применяют для приготовления селективных сред.
и доводят этой же кислотой объем до метки.
Раствор фильтруют через бумажный фильтр и хранят при температуре (4±2) °С в хорошо закупоренных сосудах из темного стекла не более 3 мес.
Применяют для приготовления индикатора при определении нитратредуцирующих свойств.
.
Объем доводят до метки тем же раствором уксусной кислоты. Раствор фильтруют через бумажный фильтр и хранят при температуре (4±2) °С в хорошо закупоренных сосудах из темного стекла не более 2 мес.
Применяют для приготовления индикатора при определении нитратредуцирующих свойств.
. Объем доводят до метки тем же раствором уксусной кислоты. Раствор фильтруют через бумажный фильтр и хранят при температуре (4±2) °С в хорошо закупоренных сосудах из темного стекла не более 2 мес.
Применяют в качестве индикатора при определении нитратредуцирующих свойств.
. Объем доводят до метки тем же раствором уксусной кислоты.
Применяют в качестве индикатора при определении нитратредуцирующих свойств.
. Объем доводят до метки дистиллированной водой.
Применяют для приготовления индикатора при определении нитратредуцирующих свойств.
стерильной дистиллированной воды. Раствор хранят в сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
Применяют для приготовления агара желточного с полимиксин В или полимиксин М сульфатом.
3.1.10. Эмульсию яично-желточную готовят по ГОСТ 10444.7.
3.2. Приготовление питательных сред
3.2.1. Селективный агар для выделения и идентификации, выпускаемый Дагестанским НИИ питательных сред.
, г:
ферментативный гидролизат кормовых дрожжей
12,0
-лецитин или яичное масло
1,0
натрий хлористый
3,0
натрий лимоннокислый трехзамещенный
5,0
литий сернокислый
5,0
маннит
5,0
бромтимоловый синий
0,04
агар микробиологический 10,0.

дистиллированной воды. Колбу закрыть рыхлой ватной пробкой, нагреть на слабом огне до кипения и кипятить 2-3 мин. Раствор профильтровать через ватный фильтр, фильтрат разлить по колбам. Стерилизовать 20 мин при температуре (121±1) °С, рН среды после стерилизации 7,4±0,1.
Применяют в качестве селективной среды.
3.2.2. Лецитин-агар для выделения В. cereus из консервированных продуктов, выпускаемый Дагестанским НИИ питательных сред.
, г:
ферментативный гидролизат кормовых дрожжей
-лецитин или яичное масло
1,0
натрий хлористый
3,0
бромтимоловый синий
0,04
агар микробиологический 10,0.

дистиллированной воды; колбу закрыть рыхлой ватной пробкой, нагреть на слабом огне до кипения и кипятить 2-3 мин. Профильтровать через ватный фильтр. Фильтрат разлить по колбам и стерилизовать 20 мин при температуре (121±1) °С.
Охлажденную до 45-50 °С среду разлить в чашки Петри. После застывания агара чашки подсушить в термостате 40-60 мин. Цвет готовой среды - салатный, рН среды после стерилизации 7,4±0,2.
Применяют в качестве селективной среды для выделения В. cereus из консервированных продуктов.
3.2.3. Агар желточный с хлористым натрием, полимиксин В или полимиксин М сульфатом и 2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлоридом.
мясо-пептонного бульона по ГОСТ 10444.1 добавляют 45,0 г хлористого натрия и 15,0 г агара. Смесь кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. Среду стерилизуют в течение 15 мин при температуре (121±1) °С. рН среды после стерилизации 7,2±0,1. Хранят при температуре (4±1) °С не более 1 мес.
желточной эмульсии, хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри.
Применяют в качестве селективной среды.
3.2.4. Агар желточный с маннитом, полимиксин В или полимиксин М сульфатом и феноловым красным.
мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, добавляют 5,0 г хлористого натрия, 10,0 г маннита и 15,0 г агара. Смесь кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. Среду стерилизуют в течение 15 мин при температуре (121±1) °С. рН среды после стерилизации 7,1±0,1. Хранят при температуре (4±1) °С не более 1 мес.
желточной эмульсии, хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри.
Применяют в качестве селективной среды.
3.2.5. Агар мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.
Применяют для морфологической и биохимической идентификации.
3.2.6. Среда с индикатором бромкрезоловым пурпуровым и глюкозой, выпускаемая Дагестанским НИИ питательных сред.
, г:
сухой питательный агар
7,3
глюкоза
3,65
натрий фосфорнокислый двузамещенный
0,38
натрий хлористый
3,65
бромкрезоловый пурпуровый 0,02.

холодной дистиллированной воды, кипятят 1-2 мин, не допуская пригорания, фильтруют, разливают в пробирки столбиком 10-12 см. Стерилизуют 20 мин при температуре 110 °С. рН среды после стерилизации 7,0±0,2, цвет - фиолетовый.
Применяют для определения анаэробной ферментации глюкозы.
3.2.7. Среда с индикатором бромкрезоловым пурпуровым и маннитом, выпускаемая Дагестанским НИИ питательных сред.
, г:
сухой питательный агар
7,3
маннит
3,65
натрий фосфорнокислый двузамещенный
0,38
натрий хлористый
3,65
бромкрезоловый пурпуровый 0,02.

. Стерилизуют 20 мин при температуре 110 °С. рН среды после стерилизации 7,0±0,2, цвет - фиолетовый.
Применяют для определения биохимических свойств.
3.2.8. Пептонную среду с глюкозой готовят по ГОСТ 10444.1.
Применяют для определ